（国家饲料工程技术研究中心）
大肠杆菌是年由Escherich发现的，很长时间里，它被认为是肠道菌群的正常组成，认为是非致病菌，到了20世纪中叶，发现有一些特殊血清型的大肠杆菌对人和动物具有病原性，尤其是对于新生儿和幼畜和幼禽，常引起严重的腹泻与败血症。当前大肠杆菌给养禽业带来的损失越来越大，其难于治愈、死亡率高、极易复发等临床特点，正困扰着基层广大养殖户和兽医工作者。抗生素的使用使其耐药性逐渐增大。
肠杆菌肽是由肠杆菌科细菌产生的抑制大肠杆菌和相关病株的抗菌肽。肠杆菌肽是低分子量的多肽。它体积小，能够抵抗一些蛋白酶而且具有很强的热稳定性。
本实验目的是为了探究肠杆菌肽对不同致病血清型大肠杆菌的抑制作用，测定肠杆菌肽对大肠杆菌抑菌圈的有无与直径大小，为其取代抗生素来杀灭大肠杆菌提供参考。
1材料与方法
1.1培养基的配制
1.1.1液体LB培养基的配制
蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化钠5g，用蒸馏水定容至ml，高压灭菌（℃，30min）备用。
1.1.2LB固体培养基的配制
蛋白胨1.0g、酵母提取物0.5g、氯化钠0.5g、琼脂粉1.2g，用蒸馏水定容至ml，高压灭菌（℃，30min）备用。
1.1.31.5%琼脂配制
1.5g琼脂粉定容至ml蒸馏水中，高压灭菌（℃，30min）备用。
1.2菌种活化
将各株大肠杆菌平板划线后，挑取单菌落于5ml试管LB液体培养基中，37℃r/min振荡培养12h，备用。
1.3上样肠杆菌肽溶液的制备
0.12mg肠杆菌肽纯品加入到3ml灭菌蒸馏水中，用漩涡混合器混合均匀后，用高速离心机g离心5min，取上清。
0.3g肠杆菌肽市售产品加入到3ml灭菌蒸馏水中，用漩涡混合器混合均匀后，用高速离心机g离心5min，取上清。
1.4抑菌实验步骤
1.4.1在已灭菌培养皿中倒入10ml1.5%琼脂（已灭菌的素琼脂）进行封底；
1.4.2待琼脂凝固后每个平皿均匀放入4个已灭菌小钢管；
1.4.3取ul备用菌液加入到40-50℃的mlLB固体培养基中。轻轻摇匀，避免起泡，菌液浓度为1/；
1.4.4用50ml带刻度的灭菌离心管量取30ml加过菌液的培养基倒入培养皿中（注意不要让固体LB培养基凝固）；
1.4.5待培养基凝固后轻轻转动小钢管然后垂直拔出；
1.4.6每孔加入ul待检上清；
1.4.℃恒温培养箱培养14-16h后，观察并测量结果，取平均值。
1.5MIC测定
按照常规方法进行测定。
2结果与分析
从表1可以看出，肠杆菌肽纯品以及产品对受试的绝大多数大肠杆菌菌株都有很强的抑制作用，只有对CVCC没有抑制作用。
表2中可以看出，除对于菌株外，肠杆菌肽的MIC只有硫酸粘菌素的1/60左右，对于菌株，约为1/15，说明肠杆菌肽对这5株大肠杆菌的抑制作用比硫酸粘菌素要强得多。
3结论
3.1肠杆菌肽对不同致病血清型大肠杆菌均有抑制作用，并且效果好于硫酸粘菌素，在饲料企业成为一种抗G-药物的首选产品，不但有效解决硫酸粘菌素耐药性，同时能有效预防大肠杆菌引起的腹泻等疾病；
3.2肠杆菌肽对于大肠杆菌杀菌效果好，MIC低，不易产生耐药性，也成为兽药GMP企业一种必选产品。
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