食品中大肠菌群的测定MPN法

实验原理：

根据大肠菌群的定义进行定性试验，使用基于泊松分布的一种间接计数方法—MPN计数法定量得到食品中的大肠菌群MPN数值。

MPN法是统计学和微生物学结合的一种定量检测法。待测样品经系列稀释并培养后，根据其为生长的最低稀释度与生长的最高稀释度，应用统计学概率论推算出待测样品中大肠菌群的最大可能数。该法适用于大肠菌群含量较低的食品中大肠菌群的计数。

实验过程

1.实验准备

1.1实验试剂与器材清点

试验试剂：LST培养液、BGLB培养液

设备：超净工作台、恒温培养箱、托盘天平、灭菌锅、电炉、培养基分装装置

器皿和材料：不同规格锥形瓶、玻璃珠、发酵管及塞子、小倒管、不同规格吸量管、接种环、容量瓶、烧杯、量筒

无菌要求材料：酒精棉球、酒精灯、细棉绳、棉花、报纸或牛皮纸

其他：标签纸、标记笔

1.2灭菌器材准备

报纸、棉花塞、细棉绳

配制培养基和试剂

（1）配制无菌生理盐水

用量筒准确量取ml于ml锥形瓶中，放入玻璃珠10颗，同时用10ml刻度吸量管分别准确吸取9ml至2根25ml的试管中，并均塞上棉塞。

（2）制备LST发酵管

配制适量LST发酵管，分装到9根发酵管中，每管接取10ml，放入小导管并塞上棉塞。

（3）配制BGLB发酵管

配制适量BGLB发酵管，分装到9根发酵管中，每管接取10ml，放入小导管并塞上棉塞。

灭菌

灭菌锅准备：检查灭菌锅，确认水量，并提前加热锅内的水。

灭菌器皿清点：装有ml的生理盐水的锥形瓶、装有9ml的生理盐水的试管2根、LST发酵管9根、BGLB发酵管9根、1ml吸量管6根、10ml吸量管2根

放入高压蒸汽灭菌锅灭菌

清理超净工作台以及人员进行消毒

灭菌后，将灭菌物品取出并做好标签标记

检样的开启：按无菌操作要求开启样品包装

样品的稀释

用10ml无菌吸管分次吸取共25ml样品置于盛有ml生理盐水的无菌锥形瓶中，充分混匀，制成1：20的均匀稀释液。

用1ml无菌吸量管吸取1：10样品匀液1ml，沿瓶壁缓缓注入盛有9ml生理盐水的无菌试管内，充分混匀，制成1：的稀释液。

换用一支10ml无菌吸管，同样操作制成1；0的稀释液。

（以此类推）以上共获得4个稀释度

接种初发酵试验

根据样品的污染程度，选取3个连续稀释度的样品匀液，每个稀释度接种1管LST发酵管内，每管接种1ml。

将上述三组9支样品发酵管塞好棉花塞，包好报纸，扎好棉线，于36℃±1℃温度下培养24h±2h。

观察、判断

36℃±1℃温度下培养24h±2h后，观察小倒管内是否有气泡产生，48±2h产气者进行复发酵验证实验，如为产气者判断为大肠菌群阴性。

证实试验

将初发酵产气者，用3mm接种环沾取菌液接种BGLB发酵管进行复发酵试验，置36℃±1℃温度培养48±2h，观察产气情况。

结果观察、判断

凡复发酵BGLB发酵管产气的试管，报告为大肠菌群阳性。

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